DNAสายพันธุ์ทุกชีวิต

ลำดับตอนที่ #6 : ตัวอย่างการสกัด DNA (ตอนที่3)

  ต่อจาก สองตอนแรกนะคะ  มาถึงขั้นตอนที่ 3 ซึ่งเป็นขั้นสุดท้ายแล้วในการสกัดDNA ตอนนี้ก็จะเป็นการเตรียมเจลที่จะรันเจล  ซึ่งก็ต้องใช้ความละเอียดประณีตมากพอควร  ฉะนั้นผู้ทดลองก็ต้องมีความรอบคอบและระมัดระวัง

ตอนที่ 3.1   การเตรียมเจล

1.)  เตรียม Agarose 0.5 g ใน TBE buffer   50  ml  นำไปต้มจน agarose ละลายหมด  ตั้งทิ้งไว้จนกระทั่งอุณหภูมิลดเหลือประมาณ  50 °C แล้วเติม Ethidiumbromide ลงไป 10 µl  เขย่าให้เข้ากันแล้วเทลงบนเครื่อง electrophoresis ที่ประกอบไว้

2.)  ใส่ comb ลงไปแล้วตั้งทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องจนกระทั่งเจล set ตัว

3.)  ดึง combออก แล้วเติม TBE buffer ลงไปให้ท่วมเจล

                                    ตอนที่ 3.2 การเตรียมตัวอย่างที่จะโหลดและการทำ electrophoresis

1.)  นำDNAที่สกัดได้มา 20 µl  ใส่ในหลอด microcentifuge  แล้วเติม gelloading  buffer  2 µl

2.)  load  sample ลงใน 1%  ของ agarose gel  ที่เตรียมไว้โดย  load DNA marker ลงในเลนแรกและเลนสุดท้าย

3.)  ต่อเครื่อง electrophoresis  เข้ากับ power supply โดยใช้กระแสไฟฟ้า 15-100V

4.)  ปิด power supply เมื่อแถบสีฟ้า (loading dye)  เคลื่อนมาเป็น 2/3ของเจล

5.)  ตรวจสอบแถบDNA  บน Argarose  gel  ด้วยแสงอัลตร้าไวโอเลต  โดยใช้เครื่อง UV transiluminator

6.)  บันทึกผลการทดลองโดยดูขนาดและลักษณะของ DNA band ที่เกิดขึ้น