DNAสายพันธุ์ทุกชีวิต

ลำดับตอนที่ #5 : ตัวอย่างการสกัดDNA(ตอน2)

  เรามาต่อกันในตอนที่ 2 เลยนะคะ ซึ่งตอนนี้จะเป็นการนำDNA ไปหาค่าความบริสุทธิ์  มาดูกันเลยนะคะว่าทำยังไงต่อไป

ตอนที่ 2  การวัด Spectrophotometer

วิธีการทดลอง

1.      นำสารละลาย  DNA  ที่ต้องการจะวัดมาทำการเจือจางใน TE-buffer  5 เท่า (ให้ได้ปริมาณเท่ากับ  2 ml)

2.      นำสารละลาย DNA ที่เจือจางแล้วใส่ใน quartz  cell  แล้วนำไปวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 260และ 280nm  ด้วยเครื่อง Spectrophotometer (โดยใช้ TE-buffer เป็นblank ในการปรับศูนย์)  ค่าที่ได้ควรอยู่ระหว่าง  0.1-1.0 ถ้าเกินกว่านั้น ต้องทำการเจือจางDNA ตัวอย่างอีก

3.      คำนวณหาปริมาณDNA ได้จาก                                                                                                                      

                           ปริมาณ DNA(µg/ml) = A₂₆₀ x 50 x Dilution  factor

4.      คำนวณหาความบริสุทธิ์ของDNAที่สกัดได้

                                          Purity = A₂₆₀/A₂₈₀

ถ้าค่า  A₂₆₀/A₂₈₀          อยู่ระหว่าง  1.65-1.85  แสดงว่า  DNA ที่สกัดได้มีความบริสุทธิ์

     ถ้าค่า  A₂₆₀/A₂₈₀            <  1.65                         แสดงว่า  ปนเปื้อนด้วยโปรตีนหรือฟีนอล

      ถ้าค่า  A₂₆₀/A₂₈₀          >  1.85                         แสดงว่า  ปนเปื้อนด้วย RNA